ТОВЧ ТАЙЛБАР
Тус шинэ бутээлийн зорилго нь SARS-CoV-2 вирусийн эсрэгбиеийг илрүүлэх фермент холбоот эсрэгбиеийн урвалын аргад суурилсан оношлуур гаргахад оршино. Тус шийдэл нь SARS-CoV-2 вирусийн нуклеокапсидын фосфоппротейн болох N уургийн генийг рекомбинацийн арга ашиглан BL21 омгийн гэдэсний савханцар бактерид шилжүүлэн N уургийг экспресслэн авч, GST-tag-ийн тусламжтайгаар өсгөврийн орчноос цэврээр ялган авч, иммунохавтангийн гадаргууд адсорбцийн аргаар бэхжүүлж оношлогоонд ашиглана.
Уг арга болон оношлуураар хүний цус, сийвэнд SARS-CoV-2 вирусийн халдварын улмаас эсрэгбие үүсэж дархлаа тогтсон эсэхийг богино хугацаанд илрүүлнэ.
ТОМЬЁОЛОЛ
1. Вирусийн уургийг ялган фермент холбоот эсрэгбиеийн урвалын шинжилгээний арга ашиглан вирусийн эсрэг биед үүссэн эсрэгбие тодорхойлох замаар SARS-CоV-2 эсрэг бие илрүүлэх фермент холбоот урвалын оношлуур, түүнийг бэлтгэх аргын ялгаа нь уг оношлуур нь дараахаас бүрдэнэ:
SARS-CoV-2 вирусийн нуклеокапсидын фосфопротейн N уургийг бичил үүрт хавтангийн ёроолын гадаргууд адсорбцийн зарчмаар холбож, ёроолыг нь эсрэгтөрөгчөөр (Ад) бүрсэн бичил үүрт хавтан, болон
хүний гаммаглобулинын эсрэг, тонхууны пероксидаза энзимээр тэмдэглэсэн хоёрдугаар эсрэгбие.
2. SARS-CoV-2 эсрэг бие илрүүлэх фермент холбоот урвалын оношлуурын 1 дүгээрийн ялгаа нь бичил үүрт хавтанд хүний цусны оношлох ийлдсийг хийж, дараа нь уг хоёрдугаар эсрэгбиеийг хийн N уураг, ийлдэс дэх нэгдүгээр эсрэгбие (Аb) болон хоёрдугаар эсрэгбие гэсэн гурван уургийн үечилсэн бүтэц үүсгэх замаар хүний цусанд байгаа SARS-CoV-2 вирусийн эсрэгбиеийг илрүүлнэ.
3. Вирусийн уургийг рекомбинант байдлаар ялган фермент холбоот эсрэгбиеийн урвалын шинжилгээний аргад ашиглан тухайн вирусийн эсрэг биед үүссэн эсрэгбие тодорхойлох замаар SARS-CoV-2 вирусийн эсрэг эсрэгбие илрүүлэх фермент холбоот урвалын оношлуурт ашиглах N уургийг цэвэршүүлэн ялгаж авах аргын ялгаа нь
уг арга нь дараахаас бүрдэнэ:
SARS-CoV-2 вирусийн нуклеокапсидын фосфопротейн N уургийн генийг олшруулах,
олшруулсан генээс уг N уургийн генийн дарааллыг BamH I болон Not I энзимүүдийн тусламжтай хэрчин ялган авах,
pGEX-6P-1 векторыг BamH I болон Not I энзимүүдийн тусламжтай хэрчин ялган авах,
ялган авсан дээрх N уургийн ген болон дээрх pGEX-6P-1 хоёр молекулыг хольж Т4 лигаза энзимийн тусламжтайгаар нэгтгэн угсарч холбон клонингийн вектор гарган авах,
гаргаж авсан клонингийн векторыг гэдэсний савханцар E.coli dH5a омгийн компотент бактерийн эс рүү трансформацийн аргаар оруулж бактерийг өсгөвөрлөх,
энэхүү өсгөвөрлөн ургуулсан бактерийн клонуудаас амжилттай нэгдэж угсрагдсан дээрх клонингийн вектор бүхий колонийг сонгон авах,
энэхүү сонгон авсан колоноос N уургийн генийг суулгасан pGEX-6P-1 векторыг компотент эсээс цэврээр ялган авч E.coli BL21 бактерийн эсэд трансформацийн аргаар оруулж өсгөвөрлөн N уургийг экспресслэх болон
энэ өсгөвөрлөсөн бактерийн өсгөврөөс N уургийг цэвэршүүлэн ялгаж авах.
4. Аргын томъёоллын 3 дугаарын ялгаа нь дээрх N уургийн генийг олшруулахдаа BamH I N protein (caG GAT Cca tgt ctg ata atg gac ccc a), болон Not I N protein (tGC GGC CGC ggc ctg agt tga gtc age act) праймеруудын тусламжтайгаар pGEX-6P-1 векторт оруулж, E.coli dH5a омгийн компотент бактерийн эсэд олшруулна.
5. Аргын томьёолол 3 дугаарын ялгаа нь уг N уургийн генийг суулгасан pGEX-6P-1 плазмидийг E.coli BL21 омгийн уургийн экспресслэгч бактерийн эсэд трансформаци хийн оруулж өсгөвөрлөхдөө уургийн нийлэгжилтийг изопропил-(3-0-1-тиогалактопиранозидаар өдөөж нэмэгдүүлнэ.